Sisältö
Nestemäistä ravintoliemiä käytetään bakteerien, kuten Escherichia colin, viljelyyn. Tämän liemen reseptit vaihtelevat bakteerilajien ja geneettisten modifikaatioiden, esimerkiksi antibioottiresistenssin, läsnäolon mukaan. Liemi voidaan jähmettää lisäämällä agaria, mikä antaa bakteereille mahdollisuuden muodostaa erillisiä pesäkkeitä, kun taas nestemäisessä viljelmässä ne yksinkertaisesti dispergoituvat koko tilavuuteen. Tämä on perustavanlaatuinen, mutta välttämätön tekniikka edistyneille menetelmille, kuten geenikloonaus tai mikrobiologiset määritykset. Tässä artikkelissa oletetaan, että tavanomaisia laboratorio-Escherichia coli -kantoja on viljeltävä Luria-lieme (LB)-agarmaljoilla (tai Petri-maljoilla).
Punnitaan 10 grammaa bakteerilaatuista tryptonia, 5 grammaa hiivauutetta, 5 grammaa natriumkloridia, 15 grammaa agaria tai agaroosia ja 1 millilitra 1 N natriumhydroksidia. Sekoitetaan nämä määrät tislattua ja autoklaavoitua steriiliä vettä, kunnes saadaan 1 litra väliainetta. Autoklaavoi väliaine löysästi suljettuihin pulloihin tai pulloihin 25 minuutin ajan. Annetaan jäähtyä noin 50 celsiusasteeseen ennen kuin lisäät reagensseja, jotka tuhoutuvat korkeassa lämpötilassa, kuten antibiootit tai muut ravintolisät.
Annetaan autoklavoidun väliaineen jäähtyä 50 celsiusasteeseen ja vähintään 45 asteeseen, koska agar asettuu astiaansa ennen kuin se voidaan kaataa. Hanki steriilejä Petri-maljoja ja kaada niin paljon, että ne kattavat koko levyn pinta-alan ja vähintään puolet sen syvyydestä. Vältä levyjen ylimääräistä täyttöä ja älä anna mieluiten agaria kosketa astian yläreunaan. Anna levyjen jähmettyä steriilissä ympäristössä (esim. Laminaarivirtauskupu alla) jättämällä kannet irti konepellin nurkkaan.
Kuivaa levyt. Vaikka maljoja voidaan käyttää heti, kun ne on asetettu, agarin pintaan tulee jonkin verran kosteutta, mikä estää bakteerikoloja tarttumasta riittävästi. Siksi on parasta kuivattaa levyt ennen bakteerien levittämistä, esimerkiksi jättämällä ne istumaan huoneenlämpötilaan muutamaksi päiväksi tai puoli tuntia laminaarisen virtauspeitteen alle tai 37 ° C: n inkubaattoriin.
Varastoi levyt. Kuivatut levyt tulee pinota ylösalaisin (ylösalaisin) kansilleen ja palauttaa alkuperäiseen pakkaukseensa, sulkea teipillä ja joko kääriä folioon valolta suojaamiseksi tai sopivaan astiaan. Kirjoita aina valmistuspäivämäärä levyille ja vältä käyttämistä, jos levyt ovat yli 2 kuukautta vanhoja.