Sisältö
Escherichia coli, E. coli, on bakteeri, joka kasvaa nisäkkäiden alasuolissa. Tämä bakteeri löydettiin ensimmäisen kerran 1800-luvun lopulla. Siitä lähtien sillä on ollut pitkä historia tieteellisessä tutkimuksessa. Se on molekyyligenetiikassa yleisimmin käytetty organismi. Yksi syy siihen, että E. colia käytetään yleisesti tieteellisessä tutkimuksessa, on se, että sitä on helppo kasvattaa laboratoriossa. E. colin kasvattamista helpottavat tekijät ovat sen yksinkertaiset ravintotarpeet, nopea kasvunopeus ja kohtalaiset ylläpitotarpeet.
Steriloi siirrosilmukka asettamalla se Bunsen-polttimen liekkiin. Vie silmukan alaosa liekin läpi, kunnes se palaa punaisena.
Anna silmukan jäähtyä. Voit koskettaa sitä levyn steriiliin agariin varmistaaksesi, että se on jäähtynyt. Älä aseta silmukkaa pöydälle tai anna sen koskettaa muuta kuin steriiliä agaria tai haluttua viljelmää nyt, kun se on steriloitu.
Upota silmukka E. coli -viljelmään ja poista se sitten.
Avaa agarmalja ja liu'uta silmukka varovasti edestakaisin agarin yhden osan pinnan yli. Varo, ettet naarmuta agarin läpi silmukalla. Agar tarjoaa ravintoaineet, joita E. colin on kasvatettava.
Aseta silmukka Bunsen-polttimen liekkiin uudelleen steriloidaksesi sen. Kun silmukka sauva on jäähtynyt, kosketa sitä steriiliin levyosaan varmistaaksesi, että se on viileä, liu'uta silmukka ensimmäisen putken läpi toisen putken muodostamiseksi. Tämä toinen viiva on laimennettu versio ensimmäisestä viirasta. Toista tämä sterilointi ja liukuprosessi, kunnes agarlevyn useita osia on liukunut. Syy siihen, että teet tämän myöhemmin, voit valita myöhemmin yksittäisistä, kloonaisista pesäkkeistä. Tämä auttaa varmistamaan, että sinulla on ainakin yksi osasto, jossa on yksittäisiä pesäkkeitä - ei liian tiivistettyjä (joilla on liian paljon kasvua, eikä salli valita yhden yksittäisen pesäkkeen) ja ole liian laimea (mikä ei anna pesäkkeitä) .
Steriloi silmukka liekissä viimeksi, ennen kuin laitat sen syrjään työalueelle.
Laita yläosa takaisin agarlevylle. Käännä levy ylösalaisin ja aseta se inkubaattoriin, jonka lämpötila on 37 ° C (98,6 astetta Fahrenheit). Tämä ihanteellinen inkubaatiolämpötila simuloi ihmisen kehon lämpötilaa, jossa E. coli asuu. 24 - 48 tunnin sisällä näkyvät E. coli -bakteerien pesäkkeet ilmestyvät agarmaljalle.