Sisältö
Biokemia tutkii molekyylejä, kuten DNA: ta, RNA: ta ja proteiineja. Blottaustekniikat ovat sitä, mitä tutkijat käyttävät erottamaan nämä tyypit molekyyleistä. Soluissa ne ovat seoksena. Blottauksen avulla tutkijat voivat löytää yhden proteiinin monien joukosta, kuten neula heinäsuovasta. Blottaus tehdään yleensä antamalla DNA: n, RNA: n tai proteiinin seoksen virtata geelilevyn läpi. Tämä geeli sallii pienten molekyylien liikkua nopeammin kuin suurempien. Erotetut molekyylit puristetaan sitten membraania vastaan, mikä auttaa siirtämään molekyylejä geelistä kalvoon. Molekyylit tarttuvat kalvoon, mutta pysyvät samassa paikassa toisistaan erillään, ikään kuin ne olisivat vielä geelissä.
Western Blot
Western-blottaus on yleinen tekniikka proteiinien erottamiseksi koon mukaan, mutta suorassa pylväässä. Nämä yhdensuuntaiset pylväät antavat tutkijoille mahdollisuuden vertailla proteiinimäärää eri näytteissä, jotka suoritetaan aivan vierekkäin, kuten keilaratoja. Esimerkiksi, jos testaat lääkkeen eri määrien vaikutusta solujen kasvuun, käsittelisit neljää eri soluryhmää eri määrällä lääkettä. Sitten voit rikkoa solut auki ja ajaa kunkin ryhmän proteiinit erillisillä kaistoilla geelissä. Proteiinien levittäminen tällä tavalla antaa sinun nähdä, mitä kasvava lääkepitoisuus tekee tietylle proteiinille.
Northern Blot
Northern-blottausta käytetään RNA: n havaitsemiseksi. Solut voidaan rikkoa auki niiden RNA: n vapauttamiseksi. Eri solutyypeistä saatua RNA: ta voidaan ajaa erillisillä kaistoilla geelissä. Geeli leviää eri RNA: n koon mukaan. Nämä siistit, yhdensuuntaiset RNA-rivit antavat tutkijalle mahdollisuuden vertailla, millä solutyypillä on kuinka paljon mitä RNA: ta. Tämän menetelmän avulla tutkija voi määrittää, onko jonkin tietyn taudin soluissa enemmän tätä RNA: ta vai vähemmän kyseistä RNA: ta. Northern-blottaus voi paljastaa, kuinka sairaus toimii RNA-tuotannon tasolla.
Southern Blot
Southern-blottaus on alkuperäinen blottaustekniikka, joka käynnisti nimeämisjärjestelmän. Sen keksi Edwin Southern. Southern-blottia käytetään DNA: n määrän havaitsemiseksi seoksessa. Aivan kuten proteiinien ja RNA: n kanssa, solun DNA voidaan vapauttaa, kun tämä solu muutetaan auki. Southern-blottaus erottaa DNA: n eri solutyypeistä koon mukaan. Kustakin näytteestä tuleva DNA levitetään siistiin, yhdensuuntaisille kaistoille. Yksittäiset DNA-kappaleet voidaan havaita radioaktiivisella tai fluoresoivalla koettimella, joka on suunniteltu sitoutumaan vain kyseiseen DNA-kappaleeseen. Radioaktiivisen koettimen energiasignaali tai fluoresoivasta signaalista tulevat valovälit kertovat tutkijoille, kuinka suuri osa DNA-kappaleesta on jokaisessa näytteessä.
Muut blotit
Kolme päämenetelmämenetelmää - länsimaista, pohjoista ja eteläistä - on muokattu eri tavoin lievästi erilaisten molekyylien havaitsemiseksi. Esimerkiksi Western blot vs. Southern blot. havaitsee vastaavasti proteiinin ja DNA: n. Jokainen modifioitu tekniikka tehdään yleensä tavanomaisella tavalla, mutta siinä käytetään erilaista menetelmää molekyylin havaitsemiseksi, joka levitetään rinnakkaisille kaistoille. Southwestern-blotit havaitsevat DNA: hon tarttuneet proteiinimolekyylit. Luoteisblotit havaitsevat proteiinimolekyylit, jotka ovat kiinnittyneet RNA: hon. Farwestern-blotit havaitsevat proteiinimolekyylit, jotka ovat kiinnittyneet muihin proteiineihin.