Sisältö
Suorituskykyinen nestekromatografia (HPLC) on laboratoriotekniikka, jota käytetään yhdisteiden erottamiseen ja tunnistamiseen. Se on eräänlainen pylväskromatografia, joka perustuu yhdisteiden erilaisiin polaarisuuksiin liuoksessa niiden erottamiseksi. HPLC eroaa tavallisesta pylväskromatografiasta, koska se käyttää painetta liuoksen pakottamiseksi pylvään läpi nopeammin, ja tuottaa siksi nopeampia, ja joskus tarkempia tuloksia. Tavoitteena on erottaa yhdisteet pylväästä ja saada ne poistumaan erikseen.
eluutiotutkimuk-
Koska HPLC: n nopeus ja se riippuu yhdisteiden erilaisista polaarisuuksista, kaksi yhdistettä, joilla on samanlainen rakenne ja polaarisuus, voivat poistua kromatografialaitteesta samanaikaisesti tai melkein samaan aikaan. Tätä kutsutaan koelutiona. Coelution tekee vaikeaksi määrittää tarkalleen, mikä osa seoksesta eluoituu missä vaiheessa.
Adsorboituneet yhdisteet
HPLC käyttää tyypillisesti lasikolonnia, joka on täynnä eri materiaaleista valmistettuja helmiä. Pylvään läpi pakotetut seokset sisältävät kemikaaleja, jotka sitoutuvat helmille eri lujuuksilla. Sitoutumisen lujuus, joka riippuu napaisuuden samankaltaisuudesta, määrää kuinka kauan kemikaali sitoutuu helmiin ennen vapautumista. Jotkut yhdisteet sitoutuvat niin voimakkaasti, että niitä ei vapauteta käytännössä koskaan pylväässä olevista helmistä eikä niitä koskaan mitata pylväästä poistuvassa liuoksessa.
Kustannus
Tyypillisiin laboratorion erotustekniikoihin sisältyy määrityksen tai erotusmenetelmän kehittäminen ja tämän määrityksen toteuttaminen sitten yksittäisten yhdisteiden erottamiseksi liuoksesta. Tämä johtaa yleensä useisiin ratkaisuihin, joille on myös suoritettava menettelyt, mikä johtaa eksponentiaaliseen lisääntymiseen monimutkaisuudessa. Vaikka HPLC voi usein yksinkertaistaa ja nopeuttaa tätä prosessia, HPLC-laitteen kehittämiskustannuksista voi tulla valtavia. HPLC-laitteen kehittäminen, vaikkakin paljon tehokkaampi, on paljon kalliimpaa kuin muiden määritysten kehittäminen yhdisteiden erottamiseksi. Tämän vuoksi se ei ole taloudellisesti kannattava monille pienille yksityisomistuksessa oleville laboratorioille.
Monimutkaisuus
HPLC: tä ei käytetä pelkästään yksinkertaisten yhdisteiden erottamiseen, sitä käytetään myös spesifisten proteiinien eristämiseen soluseoksesta. Tässä tapauksessa pylväässä olevat helmet päällystetään yleensä vasta-aineella, joka on spesifinen proteiinille, jonka sinun täytyy kerätä. Proteiinit sitovat vasta-aineet ja jäljelle jäävä liuos johdetaan pylvään läpi, sitten proteiinit vapautetaan käyttämällä toista liuosta ja kerätään. Tämä vaatii korkeasti koulutettua teknikkoa seuraamaan pylvästä koko ajan ja varmistamaan, että prosessi sujuu tarkalleen suunnitellulla tavalla.