Sisältö
Mittaa RNA-näytteesi mittaamalla sen ultraviolettivalon (UV) absorbanssi. Nano-tippa-spektrofotometri käyttää vain yhtä tai kahta mikrolitraa näytettä, jonka voit ottaa talteen. Muut spektrofotometrit vaativat paljon suuremman näytteen. Nukleotidien ekstinktiokerroin UV-aallonpituudella 260 nm 1 cm: n valoreitillä on 20. Tämän ekstinktiokertoimen perusteella 40 ug / ml RNA: n absorbanssi samoissa olosuhteissa on yksi. Näitä tietoja käyttämällä voit laskea RNA-näytteesi pitoisuuden.
Laimenna tarvittaessa näyte. Mikrokyvetin vakiolaimennos on 1:40. Tee tämä laimennus lisäämällä 2 ui RNA-näytettä 78 ui steriiliin veteen.
Noudata tietyn spektrofotometrin protokollia kalibroidaksesi kone aihiota käyttämällä ja määritä sitten näytteesi optinen tiheys UV-aallonpituudella 260 nm.
Kerro näytteen absorbanssi laimennuskertoimellasi 40 μg RNA / ml. Yhtälö olisi seuraava: ”RNA-konsentraatio (µg / ml) = (OD260) x (laimennuskerroin) x (40 µg RNA / ml) / (1 OD260 yksikkö)” (Hofstra.edu) Esimerkiksi: Jos laimennat näytteesi 1:40 ja absorbanssilukemasi oli 0,08, kerroit 0,08 x 40 x 40 = 128 µg / ml = 0,13 µg / μL.
Selvitä näytteesi puhtaus ottamalla toinen absorbanssilukema UV-aallonpituudella 280 nm. Suhde OD 260 / OD 280 osoittaa, onko näytteesi saastunut proteiinilla vai fenolilla - ja millä tasolla? Tulos 1,8 - 2,0 osoittaa laadun RNA.