Sisältö
Vaikka bakteereja ei voida nähdä paljaalla silmällä, niitä on kaikkialla. Niitä esiintyy ruoassa, maaperässä, vedessä, kodiemme pinnoilla ja ruumiissamme ja kehomme sisällä. Bakteerit esiintyvät yleensä sekapopulaatioissa. Spesifisen bakteerin eristäminen muista bakteerilajeista tietyssä näytteessä antaa mikrobiologille mahdollisuuden tutkia sen rakennetta ja toimintaa, sen tunnistamiseen käytettyjä ominaisuuksia. Mikrobiologit eristävät bakteerit usein yhdellä monista viivalevytekniikoista.
Työkalut
Inokuloivan silmukan avulla siirretään mikro-organismeja. Se koostuu nikromi- tai platinalangasta, jonka toisessa päässä on pieni pyöreä silmukka. Toinen pää on suora ja liukuu kahvaan. Saatavana on myös muovisia kertakäyttöisiä ymppäyslenkkejä. Bakteerit voidaan eristää vain, jos ne kasvavat. Mikrobiologit kasvattavat bakteereja viivalevyjen eristämiseksi matalissa, pyöreissä Petri-maljoissa, jotka on täytetty kiinteällä alustalla, nimeltään agar. Agar jäljittelee ympäristöä, jossa bakteerit luonnollisesti kasvavat. Elatusaineella täytetyt astiat ovat steriilejä ja peitetty kansilla ei-toivottujen organismien kasvun estämiseksi. Viivalevyn eristyksen aikana siirrosilmukka steriloidaan toistuvasti Bunsen-polttimen liekissä.
Periaate
Pöytälevytekniikka on suosituin menetelmä spesifisten bakteerien eristämiseksi näytteestä, joka sisältää mikro-organismien seosta. Tekniikka laimentaa olennaisesti organismien määrää ja vähentää niiden tiheyttä. Sen avulla mikrobiologit voivat erottaa ja eristää yksittäiset bakteeripesäkkeet. Pesäke on näkyvä bakteeriklusteri. Kaikki yhden pesäkkeen bakteerit ovat peräisin samasta bakteerisolusta. Näin ollen yksittäiset pesäkkeet ovat ”puhtaita” pesäkkeitä. Puhdas pesäke siirretään toiselle levylle puhtaan viljelmän tuottamiseksi, joka koostuu yhden tyyppisistä bakteereista.
menettely
Kun se tehdään oikein, viivalevyn eristys ohentaa näytteen ja antaa yksittäisille bakteerisoluille kehittyä eristetyiksi pesäkkeiksi. Mikrobiologi aloittaa steriloimalla siirrosilmukan liekissä. Hän jäähdyttää silmukan koskettamalla sitä agariin, upottaa sitten silmukan näytteeseen ja levittää sen edestakaisin peittämään osan levystä. Hän steriloi silmukan, jäähdyttää sen ja inokuloi levyn toisen viereisen osan vetämällä silmukan ensimmäisen osan läpi useita kertoja ja peittämällä toisen osan siksak-liikkeellä. Tämä poimii pienen määrän bakteereja ensimmäisestä osasta ja siirtää ne toiseen osastoon. Se kuinka monta kertaa tämä perusmenetelmä toistetaan, riippuu käytetystä viivalevymenetelmästä. Menetelmästä huolimatta alkuperäistä näytettä käytetään inokuloimaan vain levyn ensimmäinen osa.
Streak Plate Method
Streak-levymenetelmät vaihtelevat rajattujen agar-osien lukumäärän mukaan. T-putki-menetelmä käyttää kolmea osaa: yläosa ja kaksi yhtä kokoista alaosaa. Alkuperäinen siirroste asetetaan levyn yläosaan. Bakteerit vedetään yläosasta toiseen alaosasta, sitten tuosta alaosasta toiseen. Neljännittäismenetelmässä neljä samansuuruista osaa raidataan. Jatkuvaan viivausmenetelmään sisältyy tyypillisesti levyn yläosan inokulointi, sen kiertäminen 180 astetta ja levyn toisen puolen inokulointi steriloimatta silmukkaa tai vetämällä bakteereja edellisestä osasta.