Sisältö
- Sarjalaimennukset
- Levyjen valmistelu tiitterin laskemiseksi
- Virustitterin laskeminen ja laskeminen
- varoitukset
Viruksen tiitterin laskeminen on monimutkainen tapa sanoa, että tutkija laskee virusten määrän tietyssä näytteessä. Virustitterien laskemiseksi tutkijat infektoivat kasvavien bakteerien levyt virusliuoksilla vaihtelevilla konsentraatioilla ja selvittävät virusten määrän alkuperäisessä liuoksessa laskemalla virusinfektiosta kuolleet bakteerit.
Sarjalaimennukset
Laita käsineet, täytä 10 viljelyputkea 9 ml: lla liemellä ja merkitse ne ”10 ^ -1”, “10 ^ -2”, “10 ^ -3” ja niin edelleen, kunnes ”10 ^ -10”. Nämä putket käytetään viruksen sarjalaimennoksiin, joita käytetään faagitiitterin laskemiseen. Koska virukset voivat kasvaa uskomattoman korkeiksi pitoisuuksiksi, sinun on laimennettava ne, jotta ne voidaan laskea tehokkaasti. Jokainen putki edustaa viruksen kymmenkertaista laimennusta.
Ota 1 ml virusviljelmää, jolle haluat laskea faagitiitterin, ja siirrä se pipetillä putkeen, jonka otsikko on ”10 ^ -1”. Sekoita putki hyvin. Tämä on ensimmäinen kymmenkertainen laimennoksesi.
Ota 1 ml sekoitettua viljelmää putkesta, jossa on merkintä “10 ^ -1”, ja siirrä se uudella pipetillä seuraavaan putkeen, jonka etiketti on “10 ^ -2”. Sekoita myös tämä putki.
Jatka tätä mallia luodaksesi sarjalaimennussarjan. Lopputuloksena on 9 9 ml: n putkea ja 1 10 ml: n putki. Putkisi viruskuormitukset laimennetaan missä tahansa 10 kertaa (ensimmäinen putki) tai 100 kertaa (toinen putki) kymmeneen miljardiin kertaa (viimeinen putki).
Levyjen valmistelu tiitterin laskemiseksi
Ota 10 putkea tryptonipehmeää agaria ja 10 Petri-levyä ja merkitse ne vastaaviksi sarjalaimennusputkisi kanssa.
Löysää korkkeja, jotta ne eivät irtoa lämmössä, ja aseta agariputkisi kiehuvan veden dekantterilasiin. Tämä sulattaa agarin niin, että voit kaataa sen Petri-maljoihin.
Siirrä putket kuumavesikylpyyn, joka on asetettu vähintään 45 asteeseen. Tämä varmistaa, että agarisi ei jähmetty putkissa, ennen kuin sinulla on mahdollisuus kaataa se Petri-maljaan.
Lisää kaksi tippaa bakteeriviljelmää agarisi ja sekoita se varovasti. Nämä ovat tappavia bakteereja, joiden avulla voit laskea viruspartikkelien määrän tietyssä liuoksessa.
Lisää 1 ml jokaisesta sarjalaimennuksesta vastaavaan agar-putkeensa, kun putket ovat vielä kuumavesikylvyssä. Esimerkiksi 1 ml 10 ^ -1-sarjalaimennoksestasi tulee mennä agariputkeen, jossa on merkintä “10 ^ -1”.
Sekoita kukin putki ja kaada sitten jokainen putki Petri-levyyn vastaavalla etiketillä. Näin saadaan ohut kerros agaria, joka on inokuloitu bakteereilla ja viruksilla jokaisessa levyssä. Anna levyjen kasvaa yön yli inkubaattorissa.
Virustitterin laskeminen ja laskeminen
Poista levyt inkubaattorista ja tutkia ne. Sinun pitäisi nähdä sameat alueet koko levyllä, joilla bakteerit ovat kasvaneet, lukuun ottamatta pieniä kirkkaita pisteitä, joita kutsutaan plakkiksi. Nämä plakit ovat kuolleiden bakteerien laikkuja, ja kukin plakki edustaa yhtä virusta.
Etsi levy, jossa on 30-300 plakkia, ja laske täsmällinen plakkien lukumäärä.
Ota lautasella olevien levyjen lukumäärä ja kerro 10: llä. Jos lasket 157 plakkia, saat 1570.
Kerro edellisessä vaiheessa saamasi lukumäärä käänteisellä numerolla laimennusputkessasi. Esimerkiksi, jos valitsemasi levy oli 10 ^ -5 levyä, kerroit 1570: llä 10 ^ 5: lla saadaksesi 157000000. Tämä lopullinen luku on faagitiitteri ja edustaa virusten määrää alkuperäisessä viljelmässäsi millilitrassa.