Sisältö
Polymeraasiketjureaktio (PCR) ja sen tieteellinen sukulainen, ekspressoitujen geenien kloonaus, ovat kaksi 1970-luvun ja 1980-luvun bioteknologista läpimurtoa, joilla on edelleen merkittävä rooli taudin ymmärtämisessä. Nämä molemmat molekyylitekniikat antavat tutkijoille keinot tuottaa enemmän DNA: ta eri tavoin.
Historia
Molekyylibiologi Kary Mullis mullisti geenitieteen ajatellessaan polymeraasiketjureaktiota (PCR) keväällä 1983, joka sai hänelle 1993 Nobelin kemian palkinnon. Tämä läpimurto tapahtui kloonaustutkimuksen kantapäällä, joka juontaa juurensa 1902. Mitään merkittävää edistymistä kloonauksessa tapahtui vasta marraskuussa 1951, jolloin Philadelphian tutkijaryhmä kloonoi sammakon alkion. Suuri läpimurto tapahtui 5. heinäkuuta 1996, kun tutkijat kloonasivat ”Dolly” -lampun jäädytetyn rintaraudan solusta.
PCR ja kloonaus
Kloonaus tekee yksinkertaisesti yhden elävän organismin toisesta, jolloin syntyy kaksi organismia, joilla on samat tarkat geenit. PCR antaa tutkijoille mahdollisuuden tuottaa miljardeja kopioita DNA-kappaleesta muutamassa tunnissa. Vaikka PCR vaikuttaa kloonaustekniikkaan tuottamalla suuria määriä kloonattavaa DNA: ta, PCR kohtaa kontaminaation vaikeudet, jolloin myös ei-toivottua geneettistä materiaalia oleva näyte voidaan kopioida ja tuottaa väärä DNA.
Kuinka PCR toimii
PCR-prosessiin sisältyy DNA: n hajottaminen kuumentamalla sitä, mikä purkaa DNA-kaksoiskierre erillisiin yksittäisiin juosteisiin. Kun nämä juosteet on erotettu, DNA-polymeraasiksi kutsuttu entsyymi lukee nukleiinihapposekvenssin ja tuottaa DNA: n kaksoisketju. Tämä prosessi toistetaan uudestaan ja uudestaan, kaksinkertaistamalla DNA: n määrä kussakin syklissä ja lisäämällä DNA: ta eksponentiaalisesti, kunnes luodaan miljoonia kopioita alkuperäisestä DNA: sta.
Kuinka kloonaus toimii
DNA-kloonaukseen sisältyy ensin lähteen ja vektori-DNA: n eristäminen ja sitten entsyymien käyttäminen näiden kahden DNA: n leikkaamiseksi.Seuraavaksi tutkijat yhdistävät lähteen DNA: n vektoriin DNA-ligaasientsyymillä, joka korjaa silmukan ja luo yhden DNA-juosteen. Tämä DNA viedään sitten isäntäorganismin soluun, missä se kasvaa organismin kanssa.
Sovellukset
PCR: stä on tullut rikosteknisen tutkimuksen vakioväline, koska se voi kertoa hyvin pieniä DNA-näytteitä usean rikollisuuden laboratoriotestausta varten. PCR: stä on tullut hyödyllistä myös arkeologeille tutkia eri eläinlajien evoluutiobiologiaa, mukaan lukien tuhansien vuosien ikäiset näytteet. Kloonaustekniikka on tehnyt suhteellisen helpoksi geenejä sisältävien DNA-fragmenttien eristämisen geenitoiminnan tutkimiseksi. Tutkija uskoo, että luotettavaa kloonausta voidaan käyttää viljelyn tuottavuuden tehostamiseen replikoimalla parhaat eläimet ja kasvit ja myös tehdä lääketieteellisiä testejä tarkempia tarjoamalla koe-eläimiä, jotka kaikki reagoivat samalla tavalla samaan lääkkeeseen.