Entsyymi on proteiini, joka katalysoi (lisää nopeutta) kemiallisia reaktioita. Useimpien entsyymien optimaalinen lämpötila tai lämpötila, jossa entsyymit helpottavat reaktioita parhaiten, on välillä 35 - 40 astetta. Lämpötilan nousu tässä ikkunassa lisää reaktionopeutta, koska se virittää molekyylejä ja lisää nopeutta, jolla entsyymit / reagenssit törmäävät ja reagoivat tuotteen valmistamiseksi. Lämpötilan liiallinen nostaminen voi kuitenkin denaturoida entsyymin ja estää sitä toimimasta ollenkaan.
Määritä optimaalinen entsyymilämpötila kuumentamalla reaktio rajattomilla määrinä ja ottamalla reaktiosta pieniä näytteitä sen määrittämiseksi, milloin tuotteen tuoton enimmäisnopeus tapahtuu.
Valitse menetelmä. Määritä, kuinka aiot mitata tuotteesi pitoisuutta kokeen eri kohdissa. Voit esimerkiksi mitata monien tuotteiden pitoisuudet spektrofotometrillä ja laskemalla pitoisuus absorbanssista tai mittaamalla fluoresenssi ja laskemalla pitoisuus fluoresenssista.
Asenna kokeilu. Aseta reagenssisi ja entsyymi pieneen kansiin, kuten tuikepulloon, kansi. Reaktio alkaa. Aseta tuikepullo suurempaan huoneenlämpöisen veden dekantterilasiin. Aseta dekantterilasi lämmityslevylle. Aseta lämpömittari dekantterilasiin. Tämän avulla voit mitata reaktion lämpötilan eri kohdissa.
Ota 100 mikrolitran näyte reaktiosta huoneenlämpötilassa, noin 25 celsiusastetta. Kytke lämmityslevy päälle. Eri lämpötiloissa välillä 30 - 40 astetta (30,5, 31, 31,5 jne.) Ota reaktiostasi 100 mikrolitraa näytteitä.
Määritä tuotteesi pitoisuus jokaisessa lämpötilassa. Kun lämpötila nousee yli 40 celsiusastetta, huomaat nopeuden, jolla substraatti muuttuu tuotteeksi, koska entsyymi denaturoituu. Piste, jossa tuote tuotetaan enimmäisnopeudella, on kohta, jossa lämpötila on optimaalinen.