Sisältö
Bakteerit kasvatetaan Petri-maljoissa kiinteällä alustalla, joka tunnetaan nimellä bakteeri-agar, missä muodostetaan ympyrämäisiä pesäkkeitä. Toisin kuin yksittäiset bakteerisolut, pesäke on riittävän suuri bakteeriryhmä, jotta se voidaan nähdä paljaalla silmällä. Bakteerien kasvu voidaan mitata yksinkertaisella havainnolla, kuinka monta pesäkettä on läsnä; kvantitatiivisempiin menetelmiin sisältyy kuitenkin laskentakammion tai useammin elinkelpoisten levylukemien käyttö. Jälkimmäistä käytetään yleisimmin, koska se tarjoaa myös laadullista tietoa, kuten erilaisten kasvuolosuhteiden vaikutukset. Koska Petrimaljassa voi olla miljardeja bakteereja, mittaus edellyttää ensin näytteen laimentamista niin, että on mahdollista laskea pesäkkeiden lukumäärä.
Lisää koeputkessa 10 mikrolitraa lähtöbakteeriviljelmää 90 mikrolitraan laimennusväliainetta. Sulje putken kansi tiukasti ja vorteksoi varovasti homogeenisen seoksen saamiseksi. Nyt näyte on kymmenesosa alkuperäisestä pitoisuudestaan.
Siirrä 10 mikrolitraa tätä uutta näytettä uuteen koeputkeen, joka sisältää 90 mikrolitraa laimennusliuosta, sekoita se uudelleen. Jälleen kerran tuloksena näyte laimennetaan edelleen - nyt se on sadasosa alkuperäisestä pitoisuudestaan. Toista tämä useita kertoja, kunnes alkuperäinen näyte on laimennettu 10: n välillä4 ja 1010 ajat. Varmista, että jokainen putki on merkitty oikealla laimennoksella, esimerkiksi 10-1, 10-2 ja niin edelleen.
Annostele 10 mikrolitraa viimeisestä täydennetystä laimennuksesta agarlevylle. Levitä bakteeriliuos levitysreunan avulla agarlevyn koko pintaan. Toista tämä vielä kahdelle levylle. On myös tavallista suorittaa nämä vaiheet muiden laimennustasojen kanssa vertailun vuoksi. Varmista, että levyjen pohjat on merkitty. Aseta kannet kumpaankin maljaan ja anna agarlevyjen kuivua useita minuutteja joko laboratorion penkillä liekin alla tai inkubaattorissa. Aseta levyt inkubaattoriin, joka tulisi asettaa sopivaan lämpötilaan bakteerikantaa varten. Anna kasvaa 12-16 tuntia.
Pesäkkeiden tulisi olla näkyvissä 16 tunnin kuluttua; Jotkin geneettiset muunnokset saattavat kuitenkin vaatia pidempää (esimerkiksi värin kehittyminen). Kun pesäkkeitä on havaittavissa, ota levyt pois ja löydä sellaiset, joissa on 30-300 pesäkettä. Aseta piste pysyvällä merkinnällä petrimaljan pohjalle - agar-puolelle, ei kansiin - aina, kun pesäke on näkyvissä agarin läpi. Laske jokainen merkki piste. Toista jokaiselle lautaselle.
Bakteerien määrän mittaamiseksi aloitusviljelmässä tätä koetta varten laimennus on käännettävä laskelmissa kahteen kohtaan. Ensinnäkin, kun otit yhden mikrolitran koeputkesta lisätäksesi Petri-maljaan, otit kymmenesosan laimennetusta näytteestä, joten sinun on kerrottava kaikki 10: llä kääntääksesi se. Lisäksi, jos koeputken laimennuskerroin oli esimerkiksi 10-7 , sitten pesäkkeiden lukumäärä on kerrottava 10: llä7 laimennusvaikutuksen kääntämiseksi. Poista negatiivinen merkki eksponentista vain laskelmissa. Käytä kaavaa:
× 10 × = pesäkkeitä muodostavien yksikköjen lukumäärä (CFU) millilitrassa lähtöviljelmää. Tämä on bakteerikasvu petrimaljoissa.