Sisältö
Suorituskykyinen nestekromatografia on tekniikka seoksen laboratorioanalyysille. Sen tehokas kromatografiatyyppi, joka käyttää korkeaa painetta pelkän painovoiman sijasta, seoksen näytteen työntämiseen pylvään läpi. Näyte ruiskutetaan, sitten pumppu, joka sisältää suuria määriä paineita, auttaa siirtämään näytettä pakattua kolonnia pitkin, missä se on jaettu yksittäisiin komponentteihin. Tämä erottelu analysoidaan sitten detektorilla tulosten tuottamiseksi.
Injektiosivusto
HPLC: hen injektoimiseksi näyte on ensin liuotettava polaariseen nestemäiseen liuottimeen, edullisesti sellaiseen, jolla on tunnetut HPLC-spektrit, jotta sen tiedot voidaan erottaa näytteistä. Nestemäinen liuos, joka sisältää näytteen, asetetaan instrumenttiin ja lähetetään pylvääseen. Pistoskohdan todellinen sijainti riippuu instrumentin merkistä. Injektioprosessi on useimmissa tapauksissa automatisoitu, mutta joissakin tapauksissa laboratorion työntekijän on injektoitava näyte pienellä ruiskunneulalla.
Pumpun komponentti
HPLC-yksikön pumppukomponentti on välttämätön, koska se aikaansaa näytteen työntävän paineen pylvään läpi. Pumpun lujuus vaihtelee, mutta tehokas voi tuottaa paineen, joka on jopa 6 000 psi tai puntaa neliötuumaa kohden, joka kohdistetaan näytteen injektoinnin jälkeen. Tämän ansiosta näyte voi kulkea pylvään läpi nopeammin ja tehokkaammin kuin jos se tippuisi läpi vain käyttämällä painovoimaa.
Sarakkeen kuvaus
Pumpun läpi kolonnin läpi kulkevan näytteen lisääntynyt nopeus mahdollistaa erityyppisten pylväiden käytön kuin ne, joita käytetään yksinkertaisessa nestekromatografiassa. Pylväässä olevalla pakkausmateriaalilla voi olla paljon pienempi hiukkaskoko, mikä lisää pinta-alaa ja auttaa siten näytteen vuorovaikutusta pylvään kanssa. Useimmat HPLC-pylväät toimivat polaarisuuden kautta. Näyte liuotetaan polaariseen liuottimeen, ja pylväs koostuu pääosin ei-polaarisista hiilivedyistä. Näytemolekyylin polaariset osat kulkevat pylvään läpi hyvin nopeasti, koska ne ovat pääosin vuorovaikutuksessa liuottimen kanssa, kun taas näytteiden ei-polaariset komponentit viipyvät pylväässä muodostaen heikkoja vuorovaikutuksia pylväskomponenttien kanssa. Siksi näytteen komponentit tulevat pois kolonnista järjestyksessä useimmasta polaarisesta useimpaan kuin polaariseen.
Ilmaisintoiminto
Ilmaisimet vaihtelevat myös käytetyn HPLC-instrumentin tyypin mukaan. Suurin osa toiminnasta tapahtuu samalla tavalla. Erotettujen näytekomponenttien paistaa ultraviolettivalon lähde, kun ne tulevat pylväästä. Useimmat orgaaniset yhdisteet absorboivat tietyn määrän valoa, joten tunnistin pystyy keräämään, kuinka paljon valoa absorboi, kun ne kulkevat levitetyn valonsäteen läpi. Ilmaisin myös tallentaa komponenttien retentioajan sen järjestyksen perusteella, jossa ne tulevat kolonnista. Tämä tulos voidaan sitten analysoida piikkien pinta-alan perusteella näytteen komponenttien tarkan luonteen määrittämiseksi.