Sisältö
- Näytteiden laimennus, platointi ja inkubointi
- Manuaalinen laskenta
- Automaattinen laskenta
- Laskennan monimutkaisuus
Yksi klassisista tavoista määrittää näytteessä olevien mikrobien konsentraatio on laimentaa näyte, kasvattaa mikrobit maljoilla ja laskea pesäkkeet. Maljatut mikrobit kasvavat pesäkkeitä muodostavasta yksiköstä, joka koostuu yhdestä tai useammasta solusta, näkyväksi pesäkkeeksi, joka voidaan nähdä ja laskea. Bakteerit ovat yleisimpiä mikrobia arvioitaessa levylukemaa. Pesäkelaskelmia käytetään mikrobien havaitsemiseen ja laskemiseen maaperässä, vedessä ja ruoassa. Pesäkkeiden laskemisprotokollat korostavat tarkkaa ja metodista lähestymistapaa.
Näytteiden laimennus, platointi ja inkubointi
Jos levität vain mikrobinäytteen agarlevylle, näet niin monta pesäkettä muodostavaa yksikköä, että yksittäiset pesäkkeet sulautuvat yhteen, mikä tekee niistä mahdotonta laskea. Tämän ongelman ratkaisemiseksi sekoita näyte nestemäiseen väliaineeseen, ota pieni määrä seosta ja laimenna se edelleen. Toista tämä prosessi 6-10 kertaa. Levitä lopullinen laimennus agarmaljalle ja inkuboi sitä 4–7 päivää ennen pesäkkeiden laskemista.
Manuaalinen laskenta
Ensisijainen temppu pesäkkeiden laskemisessa on laskea jokainen pesäkkeiden piste kerran. Yksi lähestymistapa on asettaa Petri-malja ruudukon taustaan ja laskea pesäkkeet jokaisessa ruudukon solussa siirtämällä metodologisella mallilla kaikkien solujen läpi. Laskettujen pesäkkeiden merkitseminen Petri-maljan takaosaan voi myös olla hyödyllinen tapa. Yleensä sinun on laskettava vähintään kolme levyä; käytä vain 30 - 300 pesäkettä sisältäviä levyjä vahvojen päätelmien tekemiseen, ehdottaa Microbiology Network, yritys, joka tarjoaa konsultointipalveluita laboratorioille ja valmistajille. Lautaset, joissa on pesäkkeitä, joita on liian paljon laskeakseen, tai joissa on liian vähän pesäkkeitä, on uusittava laimennoksesta.
Automaattinen laskenta
Inhimillinen virhe lisää aikaa pesäkkeiden manuaaliseen laskemiseen. Sekä tarkkuuden että tehokkuuden parantamiseksi aseta Petri-malja automaattiseen pesäkkeiden laskentalaitteeseen. Automatisoidut pesäkelaskurit ottavat kuvan maljasta, erottavat pesäkkeet taustasta ja käyttävät sitten algoritmia laskeakseen pesäkkeet levyllä. Algoritmeilla voi olla vaikeuksia pesäkkeiden erottamisessa, kun kaksi tai useampi pesäke koskettaa reunoja, joten tämä on alue jatkuvaa ohjelmistokehitystä.
Laskennan monimutkaisuus
Mikrobitiheyden laskemisen tarkkuudella pesäkemäärästä on joitain rajoituksia. Pesäkkeitä muodostavat yksiköt voivat olla yksittäinen solu, soluketju tai kokonainen soluklubi. Oletuksena on, että pesäke edustaa yhtä solua, joten pesäkeluvuista lasketut pitoisuudet voivat olla alhaiset. Eri mikrobit tarvitsevat erilaisia kasvuolosuhteita, ja levyllä olevat pesäkkeet edustavat vain niitä mikrobia, jotka viihtyvät tällä kasvualustalla noissa inkubaatio-olosuhteissa. Lisäksi pesäkkeiden laskemisella ei rekisteröidä kuolleita soluja, mikä on tärkeä näkökohta, kun tarvitset solupitoisuuden alkuperäisessä näytteessä.