Sisältö
Tutkijat käyttävät sarjalaimennoksia (sarja 1:10 laimennuksia) bakteeriviljelmien populaatiotiheyden laskemiseen. Kun tippaa viljelmää, joka sisältää pienen määrän bakteereja, maljataan ja inkuboidaan, kukin solu on teoreettisesti riittävän kaukana muista soluista, jotta se muodostaa oman pesäkkeen. (Todellisuudessa jotkut pesäkkeet voivat olla kahden lähellä olevan solun jälkeläisiä, mutta tämä on harvinaista laimeissa viljelmissä, ja siten pesäkkeiden lukumäärä on erittäin hyvä arvio alun perin levylle siirrettyjen solujen määrästä.) Koska populaatiotiheys on tuntematon, on käytettävä erilaisia laimennuksia, jotta lopulta saadaan yksi levy, jolla on sopiva määrä pesäkkeitä.
Sarjalaimennukset
Merkitse kuusi koeputkea (kukin sisältää 9 ml kasvualustaa) 1: 6-merkinnällä. Merkitse kuusi agarmaljaa 1 - 6: ksi. Pipetterillä ja steriileillä 1 ml: n (ml) pipettikärjillä siirrä 1 ml bakteeriviljelmää putkeen. 1.
Sekoita hyvin ja siirrä 1 ml putkesta 1 putkeen 2 pipetillä ja steriileillä 1 ml kärjillä.
Toista vaihe 2 jäljellä oleville putkille siirtämällä joka kerta 1 ml viimeksi käytetystä putkesta seuraavaan putkeen.
Käytä pipettiä ja steriilejä 0,1 ml: n kärkeitä 0,1 ml: n siirtämiseksi putkesta 1 agarmaljalle. Liekitse L-muotoinen lasitanko ja levitä tippa tasaisesti levyn ympäri. Inkuboi levyä 48 tunnin ajan sopivassa lämpötilassa käytetyille bakteereille. Erityyppisillä bakteereilla on erilaiset optimaaliset kasvulämpötilat. Jos et löydä optimaalista kasvulämpötilaa vertailumateriaalin avulla, kokeile inkuboida levyjä 25 ja 37 asteessa.
Toista vaihe 4 siirtämällä neste joka kerta eri koeputkesta vastaavalle levylle.
Väestölaskelmat
Tarkkaile kuutta levyä ja valitse se, jolla on 30-200 eristettyä pesäkettä.
Kertoo levyllä olevien pesäkkeiden lukumäärä 10: llä laskeaksesi käytetyn laimennusputken solujen määrä millilitraa viljelmää kohti.
Kerro vaiheesta 2 saatu lukumäärä luvulla 10 ^ (levyn numero) laskeaksesi solumäärä per ml alkuperäistä viljelmää. Arvo 10 ^ (levyn numero) on viljelmän laimennuskerroin, jota käytettiin kyseisen levyn inokulointiin.